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簡述核酸電泳技術的分類和基礎原理

更新時間:2022-07-22  |  點擊率:2960
核酸電泳技術是生物化學中廣泛的一種技術,是指使用電流來操縱蛋白質(zhì)分子以用于一系列生物醫(yī)學研究、診斷和制造目的實驗的過程。
 
目前核酸電泳技術分為以下4種:凝膠電泳、醋酸纖維素薄膜電泳、等電聚焦電泳、毛細管電泳。
 
1.凝膠電泳
 
凝膠電泳是常用的一種蛋白表達分析技術。
 
技術原理是根據(jù)檢體中蛋白質(zhì)分子量大小的不同,使其在電泳膠中分離。在大腸桿菌表達純化外源蛋白的實驗中,SDS-PAGE更是較常用的操作。
 
技術應用是檢測蛋白的表達情況(表達量,表達分布),以及分析目的蛋白的純度等。聚丙烯酰胺凝膠電泳(PAGE)用于分離蛋白質(zhì)較小分子核酸。瓊脂糖凝膠電泳適用于分離同工酶及其亞型、大分子核酸等。
 
2.醋酸纖維素薄膜電泳
 
醋酸纖維薄膜電泳操作簡單、快速、廉價。
 
技術原理以醋酸纖維薄膜為支持物,由纖維素的羥基經(jīng)乙?;瞥?。這種薄膜對蛋白質(zhì)吸附小,能消除電泳中出現(xiàn)的“托尾”現(xiàn)象,具有分離速度快、樣品用量小的特點,適合于病理情況下微量異常蛋白的檢測。
 
技術應用于血清蛋白、血紅蛋白、球蛋白、脂蛋白、糖蛋白、甲胎蛋白、類固醇激素及同工酶等的分離分析中,盡管它的分辨力比聚丙酰胺凝膠電泳低,但它具有簡單、快速等優(yōu)點。
 
3.等電聚焦電泳
 
等電聚焦電泳是在電場中分離蛋白質(zhì)技術的一個重要發(fā)展。
 
技術原理是在穩(wěn)定的pH梯度中按等電點的不同來分離兩性大分子。
 
技術應用于分離分子量相近而等電點不同的蛋白質(zhì)組分,在區(qū)帶電泳中分辨率最好。常用的pH梯度支持介質(zhì)有聚丙烯酰胺凝膠、瓊脂糖凝膠、葡聚糖凝膠等。
 
4.毛細管電泳
 
毛細管電泳又稱高效毛細管電泳。
 
技術原理是以毛細管為分離通道、以高壓直流電場為驅動力的將液相分離,是一種利用電泳和電滲流的電動力學原理,在一種空芯的微小內(nèi)徑的毛細管中進行混合物的高效分離技術。
 
毛細管電泳分類為:毛細管自由溶液區(qū)帶電泳、毛細管凝膠電泳、毛細管等電聚焦電泳及膠束毛細管電動力學色譜。
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